Simoa 单分子免疫阵列超灵敏细胞因子检测服务-常见问题-诺禾致源

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Simoa 单分子免疫阵列

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常见问题

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常见问题

1. 检测灵敏度为什么可以达到 fg/mL？
传统的检测技术一般通过测量溶液整体光学信号强度来换算成分子浓度，在动态范围内，分子浓度越低，光信号强度越小。而 Simoa 采用了完全不同的检测策略，该技术利用了2.7 μm 的磁珠，每个磁珠表面有约250000个捕获抗体，靶点分子极少的天然样本或人工样本在稀释作用下，每个磁珠仅补获单个蛋白分子，随后生物素化的检测抗体与之结合，形成典型的双抗夹心结构，链霉亲和素半乳糖甘酶与生物素化的检测抗体结合后供应发光底物。Simoa 此时会将加入底物的磁珠转移到 Simoa 光盘上。每个光盘有24个芯片（Array），而每个芯片表面有238000个直径为4.25 μm 的小孔（well），小孔直径刚好仅能容纳一个磁珠即一个蛋白分子落入。小孔的反应体系仅有50 fL，磁珠经由重力作用迅速沉入小孔中后，系统会在芯片表面推一层油，一方面将除去多余的磁珠，另一方面会将化学发光信号密封在小孔中（有效减少信号扩散和交叉反应）。由于 50 fL 的反应体系极小，比传统100 μL 的体系小了20亿倍，此时即使一个的目的蛋白分子催化底物也可产生足够浓度的信号（c = m/v，此时 v 极小，因此局部浓度 c 极大），进而被 CCD 成像系统进行数字化解读。
2. Simoa 相对于传统的 ELISA 有什么优势？
Simoa 的检测灵敏度为fg/mL，是传统 ELISA 的1000倍，可以检测到传统ELISA 检测不到的细胞因子，同时可以一次实现对多个样本细胞因子的检测，大大节省了人力，实验结果重复性好。
3. 有文章发表使用过该仪器吗？
引用技术发表文献 500 余篇，包括高分杂志《Nature》、《Nature Biotechnology》、《The Lancet Neurology》、《Nature Neuroscience》、《JAMANeurology》、《The Journal of Experimental Medicine》等等。
4. 一次组多可以检测多少个细胞因子？
其最高通量可同时检测4重因子。目前，诺禾已开发120多个相关试剂盒，同时 Simoa 平台开放，客户可以通过自己的抗体实现超高灵敏度蛋白标志物的检测和试剂盒的研究开发。