自建库送样建议-诺禾致源

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自建库

1. 文库样品的制备建议
2. 自建库文库送样量
3. 测序引物送样标准
4. 特殊文库送样说明
5. 样本打包及寄送建议
- 5.1 样本的打包
- 5.2 样本的名称标识

声明：
实验室不接收《人间传染的病原微生物名录》（点击查看）的所有样品。对于高毒性动植物等样品，必须事先通过销售、客服或运营经理与诺禾致源技术人员联系，确定无高致病性和传染性后才能寄送样品。
提取风险提示和注意事项：核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系，尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响，因此较难保证单次提取满足质量要求，客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸，请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本，建议自行提取。取样过程中，需要全程佩戴手套，并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒，以免样本污染

1. 文库样品的制备建议

a. 客户自建库文库请使用1.5ml或2ml低吸附离心管装载。PCR管、八联管、96孔板等非标准管制备的文库需在送样前自行转管处理。
b. 文库信息中样品名称只能包含字母、数字，不能以数字开头，名字长度不能超过8 个字符，请用油性marker笔标注于管盖，其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《诺禾致源自建库样品信息单》保持一致。
c. 文库需为无色透明的状态，不能含有沉淀、杂质或者絮状物，不能是黏稠状态，不能有颜色。
d. 如您的文库不在诺禾进行库检，需要直接包lane上机的，需要提供5400值和 QPCR值。
e. 请打印纸质版的《诺禾致源自建库样品信息单》与文库一起寄送，并在包装外标记文库数量。以便到样时核对文库数量以及文库的样品名称，避免出现遗漏。如果无法打印纸质信息单，也请使用纸条写清文库清单和所属项目及销售姓名，并和文库包装在一起。

2. 自建库文库送样量

Illumina平台
机器类型	测序策略	最低送样浓度	数据量	体积
Novaseq6000	PE150	2nmol/或2ng/ul	X<30G	≥15ul
			30G≤X＜100G	≥25ul
			100G≤X≤400G	≥50ul
			400G＜X＜800G	≥70ul
			800G	≥70ul（每增加一条 lane增加70ul）
	PE250/PE50/SE50	2nmol/或2ng/ul	X<30M	≥15ul
			30M≤X＜100M	≥25ul
			100M≤X<400M	≥50ul
			400M	≥70ul
NovaSeq X Plus	PE150	2nmol/L或2ng/ul	X<30G	≥15ul
			30G≤X＜100G	≥30ul
			100G≤X<400G	≥70μL（10B每增加1条 lane增加130μL）
			400G≤X≤1000G	≥130μL（25B每增加1条 lane增加130μL）

MGI平台
机器类型	测序策略	送样形式	最低送样浓度	数据量	体积
DNBSEQ-T7	PE150	环化前	12nmol/L或2.5ng/μL	X≤50G	≥40μL
				50<X≤200	≥90μL
				200<X	≥100μL
				X=1700G	≥50μL（每增加一个run，需增加50μL）
DNBSEQ-T7	PE100	环化前	12nmol/L或2.5ng/μL	X<250M	≥25ul
				250M<X<1000M	≥45ul
				1000M<X	≥60ul（每增加一个run，需增加60μL）
				X=4400M	≥60ul（每增加一个run，需增加60μL）

3. 测序引物送样标准

机器类型	测序策略	送样浓度	测序引物	体积	备注
Novaseq 6000	PE150	100μmol/L	Read1/Read 2primer	≥50ul/flowcell	需包FC测序 R1/index 1 primer 需要同时提供; R2/index 2 primer 需要同时提供
	PE150	100μmol/L	Index1/Index 2primer	≥70ul/flowcell	需包FC测序 R1/index 1 primer 需要同时提供; R2/index 2 primer 需要同时提供
	PE250/PE50	100μmol/L	Read1/Read 2primer	≥30ul/flowcell	需包FC测序 R1/index 1 primer 需要同时提供; R2/index 2 primer 需要同时提供
	PE250/PE50	100μmol/L	Index1/Index 2primer	≥50ul/flowcell	需包FC测序 R1/index 1 primer 需要同时提供; R2/index 2 primer 需要同时提供
	SE50	100μmol/L	Read1 primer	≥30ul/flowcell	需包FC测序
	SE50	100μmol/L	Index1 primer	≥50ul/flowcell	需包FC测序
NovaX Plus	PE150	100μmol/L	Read1/Read 2primer	≥50ul/flowcell	需包FC测序 R1/index 1 primer 需要同时提供; R2/index 2 primer 需要同时提供
	PE150	100μmol/L	Index1/Index 2primer	≥70ul/flowcell	需包FC测序 R1/index 1 primer 需要同时提供; R2/index 2 primer 需要同时提供

4. 特殊文库送样说明

a. 甲基化文库-不适合包lane测序
送样提前沟通：由于甲基化文库不适合包lane上机测序（包 lane 基本无产出），因此如甲基化文库，建议提前与运营沟通说明，并在文库信息单中重点说明该文库为甲基化文库。Pooling文库甲基化比例低于50G：如客户要送 pooling 好的甲基化文库，建议1条lane（110G）甲基化文库控制在50G以下。根据测试经验，1条lane的甲基化文库超过 50G，产出不稳定。
周期说明：由于甲基化文库不适合包lane上机，因此周期相对较长，无法按照正常周期走，需要提前沟通。
b. 单细胞文库－不适合包lane测序
由于单细胞碱基不均衡，因此文库不适合包lane上机测序，如1条lane（110G）最多 pooling20G。

5 样本打包及寄送建议

5.1 样本的打包
（1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备，还请在送样前自行转管处理。
（2）组织样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。
（3）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。
（4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。
（5）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。
（6）为便于处理和保存，组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍（特殊的得率较低的样品除外）。
5.2 样本的名称标识
（1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。
（2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。
（3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊，建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。
（4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。